美国红枫种胚愈伤组织诱导、增殖培养技术研究初报

王振龙 张雷 翟玉敏 代勇

辽宁农业职业技术学院 辽宁营口 抚顺农业技术推广中心 辽宁抚顺

!!随着我国城市环境建设由单纯的绿化逐渐向绿

化’美化’彩化方向发展!很多企业从国外大量引

种彩叶树!但存在引种成本高’一些品种发芽率

低’种子繁殖易发生变异’常规繁殖周期长和繁殖

系数低’苗木量短期难以满足市场需求的问题%针

对上述问题!我们以美国红枫种胚为接种材料!进

行种胚愈伤组织诱导’增殖培养的研究!为进一步

开展包括美国红枫在内的彩叶树组培快繁提供理论

依据%

!!材料和方法

!"!!材料

美国红枫种子!市售%

!"#!方法

&8#8&!种子处理与接种

美国红枫种子水浸#"A后!在超净台上于

!$C的酒精液中浸泡>$L!然后放入$8&C升汞液

中浸泡&$B0+!最后用无菌水冲洗"次!以无菌滤

纸吸干种子表面水分!剥去种皮!将种胚分别接种

于诱导培养基上!每瓶接种胚&个%

&8#8#!诱导培养

愈伤组织诱导培养基见表&%培养基分别附加

$8=C 琼脂和&8%C 的葡萄糖!培养室温度为

#%^!光照为&%$$!#$$$-Y%#周后调查愈伤组

织诱导情况%

&8#8>!增殖培养

将愈伤组织切成$8%3B#小块!转接至增殖培

养基!每瓶接&块愈伤组织%两次增殖培养的培养

基分别见表#’表>%培养基分别附加$8=C琼脂

和&8%C的葡萄糖!培养室温度为#%^!光照为

&%$$!#$$$-Y%分别于#%M和&%M调查两次增殖

培养时不同培养基对愈伤组织增殖的影响%

#!结果与分析

#"!!不同培养基对愈伤组织诱导的影响

表!!不同培养基诱导愈伤组织的情况

编号培养基

调查瓶数

#瓶$

诱导率

#C$

备注

& &(#NE]_2$8% & &$$

# NE]O2#]F22$8% & $ 种胚死亡

> &(#NE]O2&]F22$8% & $ 形成幼苗

" &(#NE]O2#]F22$8% & &$$

种胚接种&周后!#号和>号种胚子叶有发褐

迹象!无愈伤组织产生!>号种胚膨大&&号和"

号培养基诱导效果较好!"号中种胚的子叶表面逐

渐膨大!向上卷起!边缘有粉红色突起%#周后!

"号愈伤组织变大!由粉红色转为黄绿色且向中间

扩展!并逐渐长大!约#3B# 左右!质地较致密!

而&号虽出现愈伤组织!但后期质地较硬!突起

少!棕红色&>号种胚发育成无菌幼苗&#号种胚

变褐死掉%相对而言!"号培养基比较适合诱导愈

伤组织#见表&$%另外!从#号与"号的培养基

成分来看!由于选用NE基本培养基的剂量不同!

培养效果则呈现明显差异!说明培养基中无机盐含

量低有利于愈伤组织诱导%这与胞外环境渗透压大

小影响细胞分裂有关%

#"#!不同培养基对愈伤组织增殖的影响

初代诱导出的愈伤组织在培养一个月后!转接

到增殖培养基!其结果见表#%综合比较诱导率与

增殖系数二项指标!%号增殖效果好于&号和D

号!而且从跟踪调查结果来看!%号愈伤组织短时

间内诱导’增殖快!质地致密疏松程度!利于下一

步的芽分化%这说明%号培养基附加的O2和较高

浓度的922!以及二者的添加比例更适合美国红

枫愈伤组织的诱导和增殖%另外!培养基中附加

_2的作用效果不明显是否与浓度低有关!需进一

步试验验证%

从第二次增殖培养结果#见表>$可以看出!

仍然是%号培养基愈伤组织诱导率高%转接半个月

后!%号培养基中的愈伤组织就形成粉红色突起!

随着培养时间延长!粉红色突起逐渐变成紫红色和

浅绿色!并不断扩大!最大的约有$8%3B#左右!!和=号中的愈伤组织诱导情况较差!有%$C以上

的愈伤组织生长慢"停止生长或死亡!所形成的愈

伤组织也较%号中的小得多#从培养基成分分析得知!愈伤组织诱导"增殖培养基必须同时添加一定

量的细胞分裂素和细胞生长素!而且不必添加

_2#!!另外!将%号增殖培养#个月"已老化的愈伤

组织再次转接到%号新鲜培养基上!半个月后的愈

伤组织生产情况见表"#从愈伤组织的生长现象可

以看出!第三次增殖的愈伤组织从原来的细胞分裂

局限在组织外缘转向了愈伤组织内部深处的局部地

区!细胞的分裂出现了瘤状结构外表和内部分化#

表-!.号增殖培养基内的愈伤组织生长情况

愈伤组织数

$瓶%

生长情况愈伤组织体积$3B>%

#% 好&8%

&% 良好$8!

! 稍差$8%

$!结论

美国红枫种胚愈伤组织最适诱导培养基为&&

#NE]D;O2#]F22$8%(最适增殖培养基为&&

#NE]D;O2#]922$8%#诱导和增殖培养基均

添加&8%C葡萄糖"$8=C琼脂(从培养基成分来

看!无机盐含量低有利于愈伤组织的诱导#对美国

红枫离体芽分化和生根试验有待于进一步研究#

参考文献!

)&*徐廷志8槭树与园林)’*8 植物杂志8 北京’中国科

学院植物研究所!&<

)#*傅家瑞8 种子生理)N*8 北京’科学出版社!

&<<=8&D=;&="8

)>*熊!丽!吴丽芳8 观赏花卉的组织培养与大规模生产

)N*8北京’化学工业出版社#$$>8

表#!不同培养基对美国红枫种胚愈伤组织增殖的影响!

编号培养基接种数$瓶% 愈伤组织数$瓶% 诱导率$C% 增殖系数

& &&#NE]_2$8% ! > "#8= &8%!#8$

% &&#NE]O2#]922$8% ! ! &$$ >8$!%8$

D &&#NE]O2#]922$8"]_2$8" ! " %!8& #8$!>8%

!!注’#%M后调查结果

--来源：【辽宁农业职业技术学院学报】